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免费代测植物甜菜碱脱氢酶ELISA试剂盒操作原理-夹心法

点击次数:203 发布时间:2018-11-05

免费代测植物甜菜碱脱氢酶ELISA试剂盒操作原理-夹心法

实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被植物甜菜碱脱氢酶(BD)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物甜菜碱脱氢酶(BD)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

需要而未提供的试剂和器材

  • 酶标仪(450nm)
  • 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒温箱
  • 蒸馏水或去离子水

 

植物甜菜碱脱氢酶ELISA试剂盒操作步骤:

  1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.   设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  3.   样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
  4.   除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

 

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