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昆虫ELISA试剂盒操作流程细则

点击次数:104 发布时间:2018-10-27

昆虫ELISA试剂盒中文简称:酶联免疫法或酶免法问:什么是种属?什么是样本?答:①种属就是所谓的,客户测得样本来源是从什么动物,植物,人,等,提取
的样本,针对每个种属有想对应的试剂盒,例如,从人的部位,收集的样本,种属就是人。那试剂盒就是测人的什么什么指标?动物的就测动物的什么指标等等。
②客户从种属身上提取的,包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆,唾液等标本,(能溶的一般情况下都可以测)
昆虫ELISA试剂盒使用说明书操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细
胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸
上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)昆虫ELISA试剂盒每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)昆虫ELISA试剂盒分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥21为阳性判定标准。

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