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人P物质(SP)ELISA试剂盒-实验类型(夹心法)

点击次数:189 发布时间:2018-10-18

人P物质(SP)ELISA试剂盒-实验类型(夹心法)实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本人P物质(SP)水平。用纯化的人P物质(SP)捕获抗体包被微孔板,制成固相体,往包被的微孔中依次加入人P物质(SP),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人P物质(SP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品人P物质(SP)含量

 

 

操作步骤

  • 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  • 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外
  • 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟
  • 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  • 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
  • 试剂盒性能:

    1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

    2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

     

    检测范围:                                              

    3.75 pg/mL - 120 pg/mL

     

    灵敏度:                                              

    最低检测浓度小于0.1 pg/mL

     

    保存条件及有效期:

    1.试剂盒保存: 2-8

    2.有效期: 6个月

 

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